PEI 配置方法及转染流程

使用方法
PEI MAX粉末配置方法：
1＞ 将1g PEI MAX 40K放入盛有900 mL水的玻璃烧杯中
2＞放入搅拌转子，放置于磁力搅拌器上，设置搅拌程序以形成一个较小的漩涡
3＞ 等待PEI MAX 40K溶解，通常需要5分钟左右
4＞ 用25 mL塑料移液管加入1 N NaOH溶液滴定至pH 6.9~7.1
5＞如果不小心超过7.1，则使用1N的盐酸和新的塑料移液管将pH重新滴定至6.9~7.1
6＞将溶液转移到1L玻璃量筒中，加入水定容至1L
7＞用无菌真空过滤膜过滤配制的转染试剂溶液
8＞按需分装，4°C储存
注：未经配制的粉末有效期为2年。

配置成液体后分装在合适的瓶子中，并且保存在4℃的转染试剂将可在6个月之内保持性能，如仅用于蛋白定性研究，分装的转染试剂可延长有效使用期至1年。

经过驯化的无血清培养悬浮细胞转染流程
一. 准备工作
转染前2~3小时，种植细胞密度为 1X10⁶/mL 于培养容器中。

二. 转染步骤
（以250 mL摇瓶为例，转染前种植细胞总体积为25mL，最终总培养体积为50mL） ，准备PEI-DNA 转染混合物（按照以下操作顺序）：
1＞在含有2.5mL（25mL 的 10%）稀释液的 EP 管中加入50ug质粒DNA（质粒用量建议在 1~2ug/10⁶细胞之间优化，此处使用1ug/10⁶细胞）
2＞轻轻地混匀/振荡溶液
3＞在DNA溶液中加入50~200uL PEI转染试剂（PEI/DNA 的比例建议在1~4：1之间优化，初次推荐使用2：1或3：1）
4＞涡旋振荡5秒钟
5＞将管子静置于超净工作台10~15分钟，使 PEI-DNA 复合物形成（建议共孵育时间不超过20分钟）
6＞用移液器轻轻上下吹打混合液3次

注：边晃动摇瓶，边将PEI-DNA 混合液加入更换了培养基的转染孔中，确保 PEI-DNA 复合物均匀分布，防止局部浓度过高。

三. 孵育培养
将细胞培养瓶放入培养箱，摇瓶培养2~3小时后，加入25 mL新鲜培养基，继续培养。
通常，在转染后36-48小时可检测到重组蛋白表达或包装的病毒颗粒。转染后72-96小时可观察到更大产量。